| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 427-1 | ||||
Resumo:A disseminação do coronavírus da síndrome respiratória aguda grave 2 (SARS-CoV-2), causador da pandemia de COVID-19, representou uma preocupação primordial para a saúde pública em todo o mundo. As alterações genéticas mais comuns no SARS-CoV-2 são substituições de nucleotídeos únicos, além de inserções e deleções já relatadas na literatura. ORF7a é uma das proteínas acessórias do SARS-CoV-2. É uma proteína transmembrana tipo I e desempenha um papel essencial nas interações vírus-hospedeiro interagindo com células imunes, como a integrina LFA-1 e monócitos CD14+, atuando como um fator imunomodulador para a ligação de células imunes e desencadeando forte resposta inflamatória. Estudos com deleções no gene orf7a de SARS-CoV-2 podem contribuir na melhor compreensão da relação desta proteína no processo de replicação e interação vírus-hospedeiro. MicroRNAs são pequenos RNAs não-codificantes de aproximadamente 22 nucleotídeos que possuem função regulatória, participando diretamente da regulação gênica pós-transcricional. Podem ser utilizados como biomarcadores de doença, permitindo um rápido e não invasivo diagnóstico, além de possíveis alvos terapêuticos para tratar a doença uma vez diagnosticada. Este trabalho tem como objetivo investigar o impacto de deleções de 190 nucleotídeos na ORF7a do SARS-CoV-2, identificadas em indivíduos positivos para COVID-19, no perfil de microRNAs em células pulmonares humanas Calu-3. Cultura de células Calu-3 foram infectadas com SARS-CoV-2 contendo ORF7a wild type e com o vírus apresentando a deleção ORF7a_∆190 com um MOI de 3, além de um mock não infectado. As células foram coletadas nos pontos de 6 e 24 hpi. Foi feita extração de RNA e o enriquecimento para RNAs pequenos, em seguida o preparo e o sequenciamento massivo paralelo das bibliotecas de microRNAs em plataforma Ion Torrent. As sequências obtidas foram processadas, analisadas e foi feita a comparação entre dois grupos visando observar variações no mirnoma entre os diferentes pontos de coleta, e entre o vírus deletado e não deletado. A partir de uma análise inicial pudemos observar que os microRNAs diferencialmente expressos identificados estavam envolvidos na regulação de genes relacionados à resposta imune, na regulação de furina (explorada pelo vírus para clivagem da proteína Spike), ciclo celular, sobrevivência celular e proliferação celular. A partir desta análise inicial, aprofundaremos mais o estudo, identificando as redes de regulação dos microRNAs identificados, utilizando a ferramenta online miRNet, e posteriormente um levantamento extenso na literatura a respeito dos microRNAs diferencialmente expressos procurando relacionar essas variações às diferentes condições analisadas.
Instituições de Fomento: CAPES, CNPq, FAPERJ Palavras-chave: SARS-CoV-2, COVID-19, ORF7a, microRNAs Agência de fomento:CAPES, CNPq, FAPERJ | |||||